本流程用于细菌16S rDNA、真菌ITS测序分析,支持二代单端测序、二代双端测序分析。

| 件/数据库 | 版本 | 用途 | 备注 |
|---|---|---|---|
| qiime2 | q2cli version 2024.2.0 | 微生物组数据分析 | https://qiime2.org/ |
SILVA 数据库 | silva-138-99 | 16S 物种分类注释 | https://www.arb-silva.de/ |
| UNITE 数据库 | UNITE_ver10_99_19 | ITS 物种分类注释 | https://unite.ut.ee/ |
菌群微生物多样性QIIME2云分析流程支持从二代测序原始数据开始,生成特征表、物种注释结果,并实现结果的可视化和统计分析。
平台支持客户自主上传数据进行分析,用户可在云平台结果展示页面查看各个模块分析结果,并对结果进行筛选、比对等分析,也可以对相应结果进行下载。

详细操作步骤
Step1:注册登录(微信扫码+手机号验证)
网址:http://cloud.mimazi.net/login.html 或http://cloud2.mimazi.net:9001/login.html
首次使用请先点击上述网址进行注册,之后每次登录,只需要直接扫码登录即可。
Step2:选择云流程和设置参数
(1)初次使用,可以点击“7天试用”,可以免费使用7天;
(2)过期后,可以选择购买,分为月度型、半年型、全年型,在有效期内,均可直接使用;
(3)可以在“会员中心”--“项目中心”--“我的流程”,直接点击使用自己购买的流程,也可以直接在网站上直接选择“细菌基因组扫描图分析全套流程”,进行数据投递;
(4)填写参数信息,上传数据
建议先下载“示例”文件,查看详细的示例格式。

上传数据,建议使用http://cloud2.mimazi.net:9001网址登录,千兆网速。
A. 任务名称:自定义填写。建议填写可识别的项目名称,以便于自己可以精准地辨识出该任务具体分析的是什么样品;
B. 数据路径:选择存有数据的文件夹(不是具体的单个文件,是包含了所有待分析数据的文件夹!!!);
C. 测序数据类型:支持双端(paired)和单端(single)测序结果;
D. 是否进行环境因子关联分析:如果选择 true,需要在原始数据路径中提供理化因子信息表(env.txt),流程会基于表格中信息执行环境因子关联分析,若无需进行环境因子关联分析,此处选择 false 即可;
E. 样本类型:提供的数据类型,可根据实际情况选择,16S 或 ITS;
F. 聚类水平:支持生成 ASV 或 OTU 水平的特征表,用于生成对应水平的代表序列和特征表;
G.特征的最低样本数阈值:用于根据特征在几个样本中出现对特征表进行筛选,值为2表明只有在至少2个样本中出现的特征才会被保留;
H.特征的最低出现频次:用于根据特征在所有样本中count值的和对特征表进行筛选,值为2表明只有所有样本中频次的和大于等于2次的特征才会被保留。
Step3:文件准备和格式确认



(1)二代NGS数据文件(必须提供)
流程支持从16S/ITS原始数据开始生成特征表,运行本流程,需提供各样本二代测序获得的原始数据(支持单端/双端测序结果)
(2)数据对照表(必须提供)
该文件应包含样本名与测序文件对应关系(制表符分隔 fqlist.txt)

(3)分组方案(必须提供)
该文件包含各样本的分组信息和实验设计(制表符分隔 group.txt)

(4)理化因子信息表(可选)
该文件包含各样本的理化性质或环境因子信息(制表符分隔 env.txt)
当参数设置中选择“是否进行环境因子关联分析”为“true”时,指定的数据文件夹中必须提供 env.txt 文件

(5)理化因子分组方案(可选)
该文件用于对提供的理化性质或环境因子信息进行分类,适用于理化性质或环境因子较多时将这些信息进行归类(制表符分隔 env_group.txt)
此处信息用于VPA(Variance partitioning analysis)方差分解分析,可用于定量评估两组或多组(2~4组)环境因子变量对响应变量(如微生物群落差异)的单独解释度和共同解释度

Step4:分析运行与结果查看、结果下载
项目运行状态,可以在“会员中心”--“项目中心”--“云流程项目”栏目中查看,分为“运行中”、“已完成”、“运行失败”,相关log文件,可以在相应任务的“运行日志”中查看。
如果任务状态显示为“已完成”,可以点击任务名称,或者右侧的“结果”查看全部的结果数据,可以点击相应任务的“项目目录”,进入数据打包下载界面。
下载数据,建议使用http://cloud2.mimazi.net:9001/login.html网址登录,千兆网速。


重要提示
(1)流程所需的数据要上传到同一个文件夹中,并且提交任务时指定这个文件夹;
(2)指定的文件夹中必须包含 “fqlist.txt” 和 “group.txt”,建议在准备数据时先下载示例数据,并直接示例文件中的信息再进行提交,不要修改文件名;
(3)若需进行环境因子关联分析,要在参数设置中将“是否进行环境因子关联分析”值设置为“true”,同时在指定的数据文件夹中提供 env.txt 文件。
(4)上传和下载数据,强烈建议使用http://cloud2.mimazi.net:9001网址登录,千兆网速。
当前版本为 1.0b版本,上架时间为2025年10月15日